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马内菲青霉菌可视化LAMP试剂盒图片
产品货号:
BTN12-13450
中文名称:
马内菲青霉菌可视化LAMP试剂盒
英文名称:
Penicillium Marneffei Colorimetric LAMP Kit
产品规格:
50T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本制品是基于独特的可视化LMAP技术开发的简单快捷的马内菲青霉菌检测试剂盒。


马内菲青霉菌(Penicillium Marneffei)是青霉中惟一的双相菌种,主要引起马内菲青霉菌病。患有该病的患者可有不规则发热、盗汗、食欲减退、进行性消瘦、周身淋巴结肿大、肝脾肿大、咳嗽、心包炎、贫血、白细胞升高、播散性脓肿等,因此对马内菲青霉菌的快速准确鉴定有重要作用。




  1. 即开即用,用户只需要提供DNA样品。
  2. 恒温扩增,可以不需要荧光PCR等贵重仪器。
  3. 含可见光染料,可以用金属浴和水浴扩增用可见光肉眼判断结果。
  4. 检测灵敏性一般比PCR高10倍以上。
  5. 特异性高,根据马内菲青霉菌保守序列设计6条特异引物,不会跟其他生物的DNA发生交叉反应。
  6. 一般30分钟内出结果,比PCR快。
  7. 上样量大,对20μL的反应体系,最大样品加样量高达到14μL。
  8. 提供无传染性的阳性对照,便于分析实验结果。
  9. 本制品只能用于定性分析,不推荐用于定量分析。
  10. 本制品足够50次20μL体系的可视化LAMP扩增。
  11. 只可用于科研。



组分规格
4×Visual LAMP MasterMix200μL
Bst2.0 DNA聚合酶50μL
20×马内菲青霉菌LAMP引物干粉50次
马内菲青霉菌LAMP阳性对照(1×104拷贝/μL)250μL
超纯水1mL

保存:-20℃,有效期一年。


引物干粉在使用前需要短暂离心,然后在离心管中加入55μL的超纯水充分混匀后再使用,未用完的需要-20℃保存。




一、样品DNA的制备
  1. 用自选方法纯化样品DNA,本试剂盒跟市场上大多数DNA提取试剂盒兼容,包括本公司的免提取的核酸释放剂。
  2. 如果有N个样品,则需要做N+2个样品制备,包括一个样品制备阳性对照(PC)和一个样品制备阴性对照(NC)。PC用10μL本试剂盒提供的阳性对照(1×104拷贝/μL)加一定量的水作为样品制备PC,加水后的总体积跟所用核酸纯化试剂盒所要求的起始样本体积一致。NC用水替代。


二、LAMP反应
  1. 反应设置:第一次使用时请把所有50μL Bst2.0 DNA聚合酶加入到4×Visual LAMP MasterMix中,轻柔颠倒20次充分混匀,然后再取用。如果有N+2个DNA纯化样品,则最好设置N+4个LAMP扩增,增加LAMP扩增阳性对照和LAMP扩增阴性对照各1个。在N+4个PCR管中加入下列成分:
    成分N+2个
    样品管
    LAMP
    阴性对照
    LAMP
    阳性对照
    4×Visual LAMP MasterMix(含Bst2.0)各5μL5μL5μL
    20×马内菲青霉菌LAMP引物混合液各1μL1μL1μL
    N+2个样品DNA各14μL--
    超纯水-14μL-
    马内菲青霉菌LAMP阳性对照(1×104拷贝/μL)--14μL
  2. 如果使用金属浴或水浴保温,没有热盖,则每个反应管中加入50μL自备的PCR级石蜡油,否则保温期间反应体系的水分会蒸发到管盖下方凝集,反应体积变化,会严重影响反应效率,增加假阳性率。最后置于65℃保温60分钟进行扩增。
  3. 如果使用常规PCR仪进行LAMP反应,设置程序时必须打开热盖,设置成65℃保温60分钟进行扩增。


三、结果分析
  1. 电泳分析:由于取样时非常容易产生气溶胶污染,污染实验环境并且非常难清除污染,所以强烈建议不要采取此方法分析实验结果。即使使用,也要在不同的房间,使用不同的移液枪操作。具体做法是取10μL LAMP扩增产物跟自备上样液混合后进行2%琼脂糖凝胶电泳。LAMP阳性对照必须有正常LAMP条带(200bp左右的梯形扩增产物),LAMP阴性结果必须无条带,否则实验结果无效。如果LAMP阳性对照和阴性对照结果正常,再分析待测样品。典型的电泳结果见下表,奇数样为阴性结果,偶数样为阳性结果:
    马内菲青霉菌可视化LAMP试剂盒
  2. 可将光(肉眼)分析:样品制备阳性对照和LAMP阳性对照的反应液将呈蓝色,样品制备阳性对照和LAMP阳性对照的反应液将呈淡蓝色或无色,否则提取实验或扩增实验无效。如果阳性和阴性对照结果正常,则实验有效,可以分析样品的情况。样品管的颜色接近扩增阳性对照管则说明样品为阳性,如果接近阴性对照则说明待测样品为阴性。典型的可将光检测结果见左图(9为阴性,10为阳性)。
    马内菲青霉菌可视化LAMP试剂盒




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